Sins-of-the-fathers department: If great-grandpa was sprayed with a fungicide commonly used on fruits, a male rat is likely to have trouble finding female companionship.

According to a study led by scientists at the University of Texas at Austin, exposure to the fungicide vinclozolin reverberates three generations later: female rats can tell the difference between male descendants of exposed and unexposed rats, the scientists are reporting this evening in the online Early Edition of the Proceedings of the National Academy of Sciences.

This might seem like just a quirky finding except for one thing: it comes in the midst of a revolution in biologists' understanding of what are called trans-generational effects. The term refers to consequences of toxic exposure that strike a generation or more down the line. In the case of vinclozolin, the chemical affects how genes in the male rats' sperm are turned on or off. (This is called an epigenetic change.) All the male rats that inherit the damaged DNA get sick young, and the damage persists down at least three generations, to the great-grandsons of exposed rats.

That kind of transgenerational genetic change was first reported in 2005 by scientists led by Michael Skinner of Washington State University; until then, no one knew that the effects of environmental toxins can be felt down through the generations. It doesn't happen through harmful mutations, which become rarer with each generation. Instead, the culprit seems to be molecular "on" and "off" switches that get attached to the sperm's DNA, and which do persist through the generations. Today's study is the first to show that females can tell something is wrong.

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Departamento de los Pecados de los Padres: Si el bisabuelo fue rociado con un fungicida habitualmente usado en las frutas, una rata macho probablemente experimente problemas en encontrar compañía femenina.

Según un estudio llevado a cabo por científicos en la Universidad de Texas en Austin, la exposición al fungicida vinclozolina repercute tres generaciones más tarde: las ratas hembra pueden notar la diferencia entre los machos descendientes de las ratas que fueron expuestas y de aquellas que no lo fueron, según reportan esta tarde los científicos en la versión en línea de la edición temprana de Proceedings of the National Academy of Sciences (Procedimientos de la Academia Nacional de Ciencias).

Este puede parecer un hallazgo estrafalario excepto por una cosa: se produce en medio de una revolución en la comprensión, por parte de los biólogos, de los denominados efectos transgeneracionales. Este término se refiere a las consecuencias de una exposición tóxica que se presentan una o más generaciones más tarde. En el caso de la vinclozolina, este compuesto afecta la forma en que los genes del esperma de las ratas macho son activados o desactivados. (Esto se denomina un cambio epigenético.). Todas las ratas macho que heredan el ADN dañado enferman en la juventud, persistiendo este daño durante al menos tres generaciones, hasta los bisnietos de las ratas expuestas.

Este tipo de cambio genético transgeneracional fue reportado por primera vez en 2005 por científicos dirigidos por Michael Skinner de la Universidad del Estado de Washington; hasta ese entonces nadie sabía sospechaba que los efectos de las toxinas ambientales podían ser detectados en las generaciones futuras. Esto no sucede a través de mutaciones peligrosas, que se tornan menos frecuentes en cada generación. En cambio, los culpables parecen ser interruptores moleculares que se unen al ADN del esperma y que resisten al paso de las generaciones. El estudio de hoy es el primero en demostrar que las hembras pueden notar que algo está mal.

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This application is a Continuation of U.S. patent application Ser. No. 08/442,423, filed May 16, 1995 now U.S. Pat. No. 6,759,392, which is a divisional application of U.S. patent application Ser. No. 08/195,005, filed Feb. 10, 1994, now U.S. Pat. No. 5,459,015 issued Oct. 17, 1995, which is a Continuation-in-Part of U.S. patent application Ser. No. 08/061,691, filed Apr. 22, 1993, now abandoned, each of which is entitled "High-Affinity RNA Ligands of Basic Fibroblast Growth Factor". U.S. patent application Ser. No. 08/195,005 is also a Continuation-in-Part of U.S. patent application Ser. No. 07/714,131, filed Jun. 10, 1991, entitled "Nucleic Acid Ligands," now U.S. Pat. No. 5,475,096 issued Dec. 12, 1995, which is a Continuation-in-Part of U.S. patent application Ser. No. 07/536,428, filed Jun. 11, 1990, entitled "Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment," now abandoned. Each of the aforementioned patents and patent applications are specifically herein by reference in their entirety.

CLAIMS:

What is claimed is:

1. A pharmaceutical composition comprising a non-naturally occurring nucleic acid ligand to basic fibroblast growth factor (bFGF), wherein said nucleic acid ligand inhibits the binding of bFGF to its receptor on the surface of a cell.

2. The composition of claim 1 wherein said nucleic acid ligand is single-stranded.

3. The composition of claim 2 wherein said nucleic acid ligand is an RNA ligand.

4. The composition of claim 3 wherein said nucleic acid ligand is comprised of 2'NH.sub.2(2'-amino)modified nucleotides.

5. A method of inhibiting the binding of basic fibroblast growth factor (bFGF) to its receptor on the surface of a cell in vivo comprising administering to said cell the pharmaceutical composition of claim 1.

6. The method of claim 5 wherein said nucleic acid ligand is single-stranded.

7. The method of claim 6 wherein said nucleic acid ligand is an RNA ligand.

8. The method of claim 7 wherein said nucleic acid ligand is comprised of 2'NH.sub.2(2'-amino)modified nucleotides.

9. The method of claim 8 wherein said nucleic acid ligand comprises SEQ ID NO:104.

DESCRIPTION:

FIELD OF THE INVENTION

Described herein are methods for identifying and preparing high-affinity RNA ligands to basic fibroblast growth factor (bFGF). The method utilized herein for identifying such RNA ligands is called SELEX, an acronym for Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment. This invention includes high-affinity RNA ligand inhibitors of bFGF. Further included within the scope of this invention are modified RNA ligands and mimetic ligands that are informed by the RNA ligands identified herein. Specifically disclosed are 2'-amino (2'-NH.sub.2) modified RNA ligands to bFGF. 2'-NH.sub.2-modified RNA ligands to bFGF were identified which inhibited the biological activity of bFGF both in vivo and in vitro.

[Disclaimer: This text was taken from the Internet with the sole purpose of serving as a source for a translation sample. The translator considers that this use does not infringe intellectual property rights. If you consider that this use infringes your rights, please send an e-mail and both the source text and its translation will be immediately removed.]

Esta solicitud es una Continuación de la solicitud de patente U.S. Ser. No. 08/442,423, presentada el 16 de mayo de 1995, actualmente Patente U.S. No. 6,759,392, que es una solicitud divisional de la solicitud de patente U.S. Ser. No. 08/195,005 presentada el 10 de febrero de 1994, actualmente Patente U.S. No. 5,459,015 otorgada el 17 de octubre de 1995, que es una Continuación Parcial de la solicitud de patente U.S. Ser. No. 08/061,691, presentada el 22 de abril de 1993, actualmente abandonada, tituladas, cada una, "Ligandos de ARN de Alta Afinidad del Factor de Crecimiento de Fibroblastos Básico". La solicitud de patente U.S. Ser. No. 08/195,005 es también una Continuación Parcial de la solicitud de patente U.S. Ser. No. 07/714,131, presentada el 10 de junio de 1991, titulada "Ligandos constituidos por Ácidos Nucleicos", actualmente Patente U.S. No. 5,475,096 otorgada el 12 de diciembre de 1995, que es una Continuación Parcial de la solicitud de patente Ser. No. 07/536,428, presentada el 11 de junio de 1990, titulada "Evolución Sistemática de Ligandos por Enriquecimiento Exponencial", actualmente abandonada. Cada una de las patentes y solicitudes de patentes mencionadas se refieren aquí en su totalidad.

REIVINDICACIONES:

Lo que se reivindica es:

1. Una composición farmacéutica que comprende un ligando que no está presente en la naturaleza, constituido por un ácido nucleico, del factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF, por su sigla en inglés), donde el referido ligando constituido por un ácido nucleico inhibe la unión del bFGF a su receptor en la superficie de una célula.

2. La composición de la reivindicación 1, donde el ácido nucleico referido es de hebra simple.

3. La composición de la reivindicación 2, donde el ácido nucleico referido es un ligando constituido por ARN.

4. La composición de la reivindicación 3, donde el ligando constituido por un ácido nucleico referido está constituido por nucleótidos cuyos grupos 2'NH sub.2 (2'-amino) están modificados.

5. Un método para inhibir la unión in vivo del factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) a su receptor en la superficie de una célula que comprende la administración de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 a la célula referida.

6. El método de la reivindicación 5, donde el ligando constituido por un ácido nucleico es de hebra simple.

7. El método de la reivindicación 6, donde el ligando constituido por un ácido nucleico es un ligando constituido por ARN.

8. El método de la reivindicación 7, donde el ligando constituido por un ácido nucleico referido está constituido por nucleótidos cuyos grupos 2'NH sub.2(2'-amino) están modificados.

9. El método de la reivindicación 8, donde el ligando constituido por un ácido nucleico comprende la secuencia SEQ ID NO: 104.

DESCRIPCIÓN:

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Se describen en este documento los métodos para la identificación y preparación de ligandos de ARN de Alta Afinidad del Factor de Crecimiento de Fibroblastos Básico (bFGF). El método utilizado aquí para la identificación de tales ligandos de ARN se denomina SELEX, un acrónimo de Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment (Evolución Sistemática de Ligandos por Enriquecimiento Exponencial). Esta invención incluye ligandos de ARN de alta afinidad, inhibidores del bFGF. Se incluyen también en el alcance de la presente invención ligandos modificados de ARN y ligandos miméticos caracterizados por los ligandos de ARN aquí identificados. Se exponen específicamente los ligandos de ARN del bFGF con modificaciones en los grupos 2'-amino (2'-NH.sub.2). Se han identificado ligandos de ARN, del bFGF, con modificaciones en los grupos 2'-NH.sub.2 que inhibían la actividad biológica del bFGF tanto in vivo como in vitro.

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